Molecular diagnosis of avian viruses in grassland passerines and captive yellow cardinals Gubernatrix cristata in Brazil / Diagnóstico molecular de vírus aviários em passeriformes campestres e cardeais-amarelos Gubernatrix cristata cativos no Brasil

Avian influenza viruses (AIVs), Newcastle disease virus (NDV), West Nile virus (WNV), adenovirus (AV) and herpesvirus (HV) play an important role in the health of human and animal populations. However, knowledge of the prevalence of these viruses in wild birds is restricted to some groups (e.g. shorebirds) or regions worldwide. Information on grassland birds of South America, which is essential for their conservation, is scarce. The objectives of the present study were to evaluate occurrences of AIV, NDV, WNV, AV and HV for the first time in a bird community of a unique protected area in southern Brazil, which is home for the critically endangered yellow cardinal (Gubernatrix cristata), and captive yellow cardinals from fauna maintainers of the Brazilian Captive Program of the Yellow Cardinal. Passerine species of wild life were caught, identified and samples (swabs) were collected from the oropharynx and cloaca of 64 passerines of 26 species (including 3 yellow cardinals) and 30 yellow cardinals of captive, for molecular diagnosis. The samples were subjected to RNA and DNA extraction and the real-time polymerase chain reaction (RT-PCR) for AIV, NDV and WNV and nested PCR for AV and HV. One yellow cardinal of captive presented a positive result for AV, this result is important for planning, managing natural attributes and making decisions in relation to integrated conservation of threatened species. This is the first report of AV in yellow cardinal and epidemiological investigation of viruses in wild passerines of the Pampa biome, in Rio Grande do Sul, Brazil.(AU)

Os vírus da gripe aviária (VGA), vírus da doença de Newcastle (VDN), vírus do Nilo Ocidental (VNO), adenovírus (AV) e herpesvírus (HV) desempenham um papel importante na saúde das populações humana e animal. No entanto, o conhecimento da prevalência desses vírus em aves selvagens é restrito a alguns grupos (por exemplo, aves limícolas) ou regiões em todo o mundo. As informações sobre as aves campestres da América do Sul, essenciais para a sua conservação, são escassas. Os objetivos do presente estudo foram avaliar a ocorrência de VGA, VDN, VNO, AV e HV pela primeira vez em uma comunidade de aves de uma área única protegida no Sul do Brasil, que abriga o cardeal-amarelo (Gubernatrix cristata) criticamente ameaçado de extinção e em cardeais-amarelos de cativeiro dos mantenedores de fauna do Programa Brasileiro de Cativeiro do Cardeal-amarelo. Espécies de passeriformes silvestres foram capturadas, identificadas e amostras (swabs) foram coletadas da orofaringe e cloaca de 64 passeriformes de 26 espécies (incluindo 3 cardeais-amarelos) e 30 cardeais-amarelos de cativeiro, para diagnóstico molecular. As amostras foram submetidas à extração de RNA e DNA e à reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-PCR) para VGA, VDN e VNO e nested PCR para AV e HV. Um cardeal-amarelo de cativeiro apresentou resultado positivo para AV, este resultado é importante para o planejamento, manejo dos atributos naturais e tomada de decisões em relação à conservação integrada de espécies ameaçadas. Este é o primeiro relato de AV em cardeal-amarelo e de investigação epidemiológica de vírus em passeriformes silvestres do bioma Pampa, no Rio Grande do Sul, Brasil.(AU)

Diseases of wild birds in southern Rio Grande do Sul, Brazil / Doenças de aves silvestres no sul do Rio Grande do Sul

Necropsy protocols of the "Laboratório Regional de Diagnóstico" of "Faculdade de Veterinária" of the "Universidade Federal de Pelotas" were reviewed, ranging the period from 2000 to 2018. Three hundred eighty one necropsies, 25 refrigerated and/or formaline fixed organs, and seven biopsies were received, representing 413 samples. Most of these materials were sent by the "Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre" of "Universidade Federal de Pelotas" (NURFS-CETAS-UFPel) and were from municipalities within the range area of LRD-UFPel influence. Of the 413 cases 55 (13.31%) corresponded to metabolic/nutritional diseases; 50 (12.10%) to trauma; 35 (8.47%) to bacterial diseases/toxi-infections; 30 (7.26%) to parasitic diseases; 28 (6.77%) to fungal diseases; four (0.97%) to viral diseases and 17 (4.11%) to other diseases. Cases where it was not possible to determine the etiology, were in severe autolysis or were inconclusive totaled 194 (46.97%). Metabolic/nutritional diseases and traumatic injuries were the main cause of death in wild birds', being Passeriformes the most affected order.(AU)

Foi realizado um estudo retrospectivo dos diagnósticos de causas de morte e de lesões em aves silvestres na região Sul do Rio Grande do Sul de 2000 a 2018. Foram revisados os protocolos de necropsia e materiais de aves silvestres encaminhados ao Laboratório Regional de Diagnóstico da Faculdade de Veterinária da Universidade Federal de Pelotas no período. Foram recebidos 381 cadáveres para necropsia, 25 órgãos refrigerados e/ou em formol e 7 biopsias, totalizando 413 materiais. A maioria desses materiais foi remetida pelo Núcleo de Reabilitação da Fauna Silvestre da Universidade Federal de Pelotas (NURFS-CETAS-UFPel) e provenientes de municípios da área de influência do LRD-UFPel. Dos 413 casos 55 (13,31%) corresponderam a doenças metabólicas/nutricionais; 50 (12,10%) a traumas; 35 (8,47%) a doenças bacterianas/toxi-infecções; 30 (7,26%) a doenças parasitárias; 28 (6,77%) doenças fúngicas; 4 (0,97%) doenças virais e 17(4,12%) outras doenças que não se encaixavam nas categorias. Ainda em nos casos em que não foi possível determinar a etiologia, apresentaram autólise acentuada ou foram inconclusivos somaram 194 (46,97%). As doenças metabólicas/nutricionais e lesões traumáticas foram as principais causas de morte de aves silvestres, sendo a ordem mais afetada a Passeriformes.(AU)

Detection of avian metapneumovirus subtype A from wild birds in the State of São Paulo, Brazil / Detecção de metapneumovirus aviário subtipo A em aves silvestres no estado de São Paulo, Brasil

The present study investigated the circulation of avian metapneumovirus (aMPV) in wild birds in Brazil. To do so, 131 samples from 366 oropharyngeal or cloacal swabs collected from 18 species of birds were tested individually or in pools by RT-PCR. Samples detected by RT-PCR were selected for DNA sequencing. Thirteen (9.9%) samples were detected by the RT-PCR targeting the N gene and four out of 13 samples were sequenced. Sequencing results showed a high identity with the aMPV subtype A. Our results confirm the circulation of the aMPV subtype A in wild birds in Brazil even five years after its last detection.(AU)

O presente estudo investigou a circulação de metapneumovírus aviário em aves silvestres no Brasil. Para tanto, 131 amostras de 366 suabes orofaringeanos ou cloacais coletados de 18 espécies de aves foram testadas individualmente ou na forma de pools por RT-PCR. As amostras detectadas por RT-PCR foram selecionadas para sequenciamento. Treze (9,9%) das amostras foram detectadas por RT-PCR tendo o gene N como alvo; destas, quatro foram sequenciadas com sucesso. Resultados do sequenciamento mostraram alta identidade com o aMPV de subtipo A. Nossos resultados confirmam a circulação de aMPV subtipo A em aves silvestres no Brasil mesmo cinco anos após sua última detecção.(AU)

Avian paramyxoviruses: detection by transmission electron microscopy techniques / Paramixovirus aviario: detección por técnicas de microscopía electrónica de transmisión

Diseases caused by avian paramyxovirus (APMV) occur in commercial, captive and wild birds worldwide, demonstrating the significant economic and ecological importance of these agents. Paramyxoviruses belong to the paramyxoviridae family, paramyxovirinae subfamily and avulavirus genus. During the period 2000 to 2011, stool and small intestine samples of 1647 birds species were sent to the Laboratory of Electron Microscopy, Biological Institute of São Paulo, Brazil, for diagnosis of viral agents. The samples were processed by negative staining (rapid preparation) and resin embedding techniques. Under the transmission electron microscope by negative staining technique, in 294 (17.8 percent) samples of 1647 were visualized paramyxovirus particles pleomorphic, roughly spherical or filamentous, measuring 100 to 500 nm of diameter containing an envelope covered with spikes and characteristic helical herring-bone-like nucleocapsid measuring 15 to 20 nm in diameter. Ultrathin sections of the small intestine fragments revealed the presence of amorphous granular intracytoplasmic inclusions surrounded by membrane and containing viral nucleocapsid measuring 10-14 nm in diameter. Immature particles budding from cell membranes, pleomorphic, spherical and tubular particles containing viral nucleocapsid strands, and the complete particles measured up to 170 nm in diameter were seen in the cytoplasm. Intranuclear inclusions containing viral nucleocapsid were also visualized. Nuclei showed a marginalized chromatin.

Las enfermedades causadas por paramixovirus (APMV) ocurren mundialmente, tanto en aves de corral, en aquellas en vida libre o en cautiverio, lo que demuestra la importancia económica y ecológica de estos virus. El paramixovirus aviario pertenece a la familia paramyxoviridae, subfamilia paramyxovirinae y género avulavirus. Durante el periodo de 2000 a 2011, muestras de heces y fragmentos del intestino delgado de 1647 especies de aves han sido enviados al Laboratorio de Microscopía Electrónica, Instituto Biológico de São Paulo, para el diagnóstico de agentes virales. Las heces y fragmentos del intestino delgado, se procesaron por las técnicas de contraste negativo (preparación rápida) y la inclusión en resina. Al microscopio electrónico de transmisión mediante la técnica de contraste negativo se visualizaron en muestras de 294 aves, partículas de paramixovirus, pleomórficas, más o menos esféricas o filamentosas, de 100 a 500 nm de diámetro que contenían un sobre cubierto por púas que presentaban característica helicoidal, con nucleocapside tipo espiga, midiendo de 15 a 20 nm de diámetro. Secciones ultrafinas de los fragmentos del intestino delgado, revelaron en el citoplasma la presencia de inclusiones granulares amorfas rodeadas por una membrana, contiendo nucleocapside viral midiendo de 10-14 nm de diámetro, partículas inmaduras brotando de las membranas celulares, partículas virales tubulares, esféricas o pleomórficas que contenían filamentos nucleocapside. Estas partículas completas alcanzaban a los 170 nm de diámetro. Fueron observadas también, inclusiones intranucleares contiendo nucleocapside viral. Los núcleos mostraron una cromatina marginal.

Vigilância sorológica para arbovírus em Juruti, Pará, Brasil / Serological survey for arboviruses in Juruti, Pará State, Brazil

O objetivo foi avaliar a prevalência de anticorpos para arbovírus na área de influência do Projeto Juruti antes da exploração mineral local. Foram examinados 1.597 soros humanos e 85 de animais silvestres. A pesquisa de anticorpos foi realizada pelo teste de inibição da hemaglutinação contra antígenos dos arbovírus mais prevalentes na Amazônia brasileira e IgM-ELISA para dengue e febre amarela. Soros humanos inibidores da hemaglutinação positivos para Mayaro e Oropouche foram também testados por IgM-ELISA. Anticorpos inibidores da hemaglutinação para alfavírus, orthobunyavirus e/ou flavivírus foram detectados, sendo 28,7 por cento reações monotípicas. Infecções recentes para Oropouche (n = 23), Mayaro (n = 5), e dengue (n = 20) foram confirmadas por IgM-ELISA. A prevalência de anticorpos inibidores da hemaglutinação em soros de animais silvestres foi de 8,2 por cento para flavivírus. Os resultados obtidos mostram que houve circulação ativa dos vírus Mayaro, Oropouche e dengue no período do estudo em humanos em Juruti, Pará, Brasil, e de diversos arbovírus em animais silvestres, indicando presença desses vírus em áreas do Município de Juruti.

This study aimed to measure the prevalence of antibodies to arboviruses in the area affected by the Juruti Project before local mining operations. A total of 1,597 human and 85 wild animal sera were examined, using the hemagglutination inhibition test against 19 antigens from the most prevalent arboviruses in the Brazilian Amazon and IgM-ELISA for dengue and yellow fever. Positive sera for Mayaro and Oropouche viruses were also tested by IgM-ELISA. Prevalence of hemagglutination inhibition antibodies to alphaviruses, flaviviruses, and orthobunyaviruses in humans was 28.7 percent, while for wild animals it was 8.2 percent for flaviviruses. Recent infections based on presence of IgM was confirmed for Mayaro (n = 5), Oropouche (n = 23), and dengue (n = 20). The results showed active circulation of the dengue, Mayaro, and Oropouche viruses in Juruti, as well as flaviviruses in wild animals, suggesting the circulation of these viruses in the Municipality of Juruti.

Follow-up of the development of femoral degeneration lesions in broilers / Seguimiento del desarrollo de lesiones por degeneración en pollos de engorde

A study was carried out in the experimental facilities of FMVZ/UNESP-Botucatu, with the aim of following-up the development and the incidence of femoral degeneration (FD). A total of 305 one-day-old male broilers were housed in six pens of 5m² each. Histological analyses of femur head collected when broilers were 0, 7, 14, 21, 28, 35, and 42 days of age were carried out. At 42 days of age, 30 birds were taken to the experimental processing plant of FMVZ for leg gross examination. Ten legs per FD score where selected, and histologically analyzed to determine the most probable age at the beginning of the lesions, and to standardize femoral degeneration lesion scores. The histological results showed that cell architecture started to disorganize at 21 days of age in the resting and proliferation zones, and that angiogenesis increased, invading the joint cartilage, The gross lesion indexes due to femoral degeneration were 22.5 percent, 42.5%, and 65% at 28, 35, and 42 days of age, respectively.

Se realizó un estudio en las instalaciones experimentales de FMVZ/UNESP-Botucatu, con el objetivo de seguir el desarrollo y la incidencia de degeneración femoral (DF) en pollos. Se utilizaron 305 polluelos de un día, machos, distribuidos en seis corrales de 5m² cada uno. Se analizaron cortes histológicos de cabezas de fémur recolectadas a los 0, 7, 14, 21, 28, 35 y 42 días de edad. A los 40 días de edad, se llevaron 30 aves al Matadero Experimental de FMVZ, para análisis macroscópico de las piernas. Se escogieron 10 muslos por escore de DF, y se analizaron histológicamente para determinar la edad más probable del inicio de la lesión y estandarizar los escores de lesión por degeneración femoral. Los resultados histológicos indicaron que a los 21 días ocurre el inicio de la desorganización celular en la zona de reposo y de proliferación, además del aumento de la angiogénesis, invadiendo el cartílago articular. Microscópicamente, el índice de lesión por degeneración femoral fue del 22.5 por ciento, 42.5% y 65% a los 28, 35 y 42 días de edad, respectivamente.

Pathological lesions observed in chickens pre-infected with LP H7N1 A/CK/Italy/1279/99 avian influenza and challenged with homologous HP H7N1 A/ostrich/Italy/984/00

Most highly pathogenic avian influenza viruses [AIV] emerge after field passage of non-pathogenic AIVs in birds. The outbreak of low-pathogenic H7N1 avian influenza virus in Italy during 1999-2000 followed by outbreak of highly pathogenic H7N1 avian influenza virus is one example in this regard. This experiment has been designed to investigate the effect of pre-infection of birds with LPAI on subsequent challenge with HPAI virus from the same outbreak. Chickens were inoculated intranasally with LP H7N1 A/CK/ItaIy/1279/99 avian influenza virus at 3 weeks of age and two groups of 10 birds were challenged at 18 and 24 weeks of age with homologous HP H7N1 A/ostrich/Italy/984/00 virus from the same outbreak. The overall mortality of birds was 60%; pre-infected challenged birds died 4-17 days post challenge [PC], while naive birds died 2 days PC. Pre-infected birds showed peritonitis, salpingitis and oophoritis in necropsy and histopathology showed very severe necrosis of the spleen, pancreas, moderate to severe necrosis of the liver and inconsistent degeneration and inflammation of the lung. Necropsy of the control bird showed petechial haemorrhage on the heart, caecal tonsils and the tracheal mucosa

West Nile virus activity in Latin America and the Caribbean

OBJETIVOS: El virus del Nilo occidental (VNO, familia Flaviviridae, género Flavivirus) se ha propagado rápidamente por toda la cuenca del Caribe desde que se detectó por primera vez en 2001. En este informe se resumen nuestros conocimientos actuales acerca de la transmisión del VNO en zonas tropicales del continente americano. MÉTODOS: Revisamos todo lo que se ha publicado sobre el tema y consultamos a autoridades de salud clave para obtener datos inéditos. RESULTADOS: Las infecciones por el virus del Nilo occidental aparecieron por primera vez en seres humanos residentes de las Islas Caimán y de los Cayos de la Florida en 2001, y en pájaros de aspecto sano de los cuales se obtuvieron muestras a principios de 2002. En 2002 se encontraron pruebas serológicas de infección por el VNO en caballos, pollos y aves de corral no estabuladas oriundas de Guadalupe, la República Dominicana y la parte oriental de México. En 2003, el VNO se diseminó dentro de México y por la parte norte de Centroamérica y se encontraron pruebas serológicas en las Bahamas, Puerto Rico y Cuba. En 2004, las primeras pruebas serológicas de actividad vírica en ecosistemas sudamericanos se detectaron en septiembre y octubre en Colombia y Trinidad, donde se observaron anticuerpos neutralizantes contra el VNO en animales domésticos. CONCLUSIONES: Estos informes esporádicos de enfermedad equina, humana y aviar en América Latina y el Caribe son desconcertantes. Es necesario aislar las cepas para determinar si la atenuación del virus u otro factor explica la carga de enfermedad reducida en ecosistemas tropicales.

Primary survey of avian influenza virus and Newcastle disease virus infection in wild birds in some areas of Heilongjiang Province, China

Two hundred thirty specimens of wild birds were collected from some areas in Heilongjiang Province during the period of 2003~2004, including two batches of specimens collected randomly from a same flock of mallards in Zhalong Natural Reserve in August and December, 2004, respectively. Primary virus isolation and identification for avian influenza virus (AIV) and Newcastle disease virus (NDV) were performed. The results showed that only two specimens of young mallards collected from Zhalong Natural Reserve in August, 2004 were positive to AIV (isolation rate 0.9%), and one strain (D57) of these two virus isolates was identified to be H9 subtype by hemagglutination inhibition test. Meanwhile, the two batches of blood serum samples of mallards from Zhalong were also examined for antibodies against AIV and NDV. Among 38 blood serum samples collected in August, antibodies against the hemagglutinin of H1, H3, H5, H6 and H9 subtypes of AIV were found in 1, 0, 2, 0 and 8 samples, respectively; and 11 samples were found with antibody against NDV. Whereas the NDV isolation in both two batches of specimens of mallard was negative, all of the 32 blood serum samples collected in December were negative for antibodies against AIV and NDV.

Apuntes para el desarrollo de sistemas de vigilancia para la detección precoz del Virus del Oeste del Nilo / Notes on the development of surveillance systems for West Nile virus early detection

A finales de 1999 se presentaron en los Estados Unidos los primeros casos humanos producidos por el Virus del Oeste del Nilo, el cual circulaba tan solo en el norte de África, Oriente Medio, el Cáucaso, los Balcanes y la cuenca Mediterránea. Luego de su aparición se ha extendido en dos años a la mitad occidental de los Estados Unidos, Canadá y algunas islas del Caribe, por lo se espera se disemine por todo el continente ya que su principal reservorio son las aves incluyendo las migratorias. En este artículo se revisan los elementos fundamentales que se han descubierto de esta nueva epidemia, así como las recomendaciones actuales sobre sistemas de vigilancia del virus

Arbovírus Ilheus em aves silvestres (Sporophila caerulescens e Molothrus bonariensis) / Ilheus arbovirus in wild birds (Sporophila caerulescens and Molothrus bonariensis)

Objetivo: Relatar o isolamento do vírus Ilheus no Estado de São Paulo e avaliar o seu impacto para a saúde pública. Métodos: O isolamento de vírus foi realizado em camundongos albinos Swiss, a partir de sangue de aves silvestres, capturadas com redes de espera tipo mist net, armadas no nível do solo, no Parque Ecológico do Tietê, São Paulo. A identificação das cepas isoladas foi feita pelos testes de inibição da hemaglutinação, fixação de complemento e neutralização em camundongos. Amostras de plasma de aves e de mamíferos silvestres foram submetidas à pesquisa sorológica para detecção de anticorpos inibidores de hemaglutinação. Resultados: Foram isoladas duas cepas do vírus Ilheus em sangue de aves das espécies Sporophila caerulescens e Molothrus bonariensis e detectados anticorpos em aves das espécies Columbina talpacoti, Geopelia cuneata, Molothrus bonariensis e Sicalis flaveola, em sagüis das espécies Callithrix jacchus e Callithrix penicillata e no quati Nasua nasua. Conclusões: O isolamento do vírus Ilheus e a detecção de anticorpos específicos em aves residentes, migratórias e de cativeiro, em sagüis e quatis, comprovam a presença desse agente no Parque Ecológico do Tietê. O comportamento migratório de aves silvestres pode determinar a introdução do vírus em outras regiões. Considerando-se a patogenicidade para o homem e a confirmação da circulação desse agente viral em área urbana, freqüentada para atividade de lazer e de educação, o risco de ocorrência de infecção na população humana não pode ser descartado

Hemagglutinating and fusogenic activities of Newcastle disease virus: studies on receptor binding specificity and pH-induced conformational changes

Vaccinal and wild strains of Newcastle Disease virus (NDV) were analyzed for cell receptor binding and fusogenic biological properties associated with their HN (hemagglutinin-neuraminidase) and F (fusion protein) surface structures respectively. The evaluation of the biological activities of HN and F was carried out respectively by determination of hemagglutinating titers and hemolysis percentages, using erythrocytes from various animal origins at different pH values. Significant differences in hemagglutination titers for some strains of NDV were detected, when interacting with goose, sheep, guinea-pip and human "O" group erythrocytes at neutral pH. Diversity of hemolysis percentagens was observed between different NDV strains at acid pH. These analysis were developed to evaluate particular aspects of the actual influence of the receptor specifity and pH on the receptor binding and fusogenic processes of Newcastle Disease viruses.